В настоящее время для диагностики заболеваний желудочно-кишечного тракта широко используются инвазивные и агрессивные методы. Для выявления H.Pylori и оценки изменений слизистой оболочки желудка необходимо проведение гастродуоденоскопии и взятие множества гастробиоптатов для исследования. Возможность оценить состояние слизистой оболочки желудка и выявить H.Pylori – огромное преимущество мофологических методов исследования. Однако морфологические методы исследования подвержены случайностям распределения бактерий H.Pylori по гастродуоденальной слизистой оболочки, так как на исследование может попасть биоптат, в котором отсутствуют H.Pylori и морфологические признаки атрофии. H.Pylori колонизирует только эпителий желудочного типа, и если в биоптате преобладает кишечная метаплазия, бактерии могут быть не обнаружены конкретно в этом фрагменте слизистой оболочки.
Активное использование в клинической практике лабораторных методов диагностики является безопасным для пациента и, в то же время, может предоставить для пациента и врача аналогичную, а в ряде случаев и более ценную по клинической значимости информацию.

Основные лабораторные методы, используемые для диагностики инфекции H.Pylori:

• Количественное определение уровня антител класса IgA, IgG к H.Pylori.
• Определение H. Pylori DNA молекулярно-биологическим методом (ПЦР).
• Определение типа H.Pylori методом Western blot.

Цель определения:

• Установить этиологический фактор заболевания;
• Оценить степень патогенности и эффективность лечения хеликобактерной инфекции – наиболее частой причины заболеваний желудка.

В последние годы были разработаны диагностические тест-системы, которые обладают высокой чувствительностью и позволяют количественно определять антитела к H. Pylori класса IgA, IgM, IgG в сыворотке крови больного. Такие тест-системы можно применять для оценки эффективности эрадикации H. Pylori. Было показано в сравнении с инвазивными методами (гистологический, уреазный), что если через 30-40 дней после терапии значения титра антител IgG уменьшилось на 20 % или более, то в результате лечения наступила эрадикация H.Pylori. Если значение титра антител повышается, не изменяется или его уменьшение составляет менее 20 %, то это необходимо расценивать как отсутствие эрадикации.
Молекулярно-генетический метод (полимеразная цепная реакция) является высокочувствительным и специфичным и по диагностической ценности имеет преимущества перед другими методами диагностики H. Pylori, включая гистологический и курьтуральный методы. Преимуществами данного метода являются высокая специфичность (обеспечивается подбором праймеров, комплементарных уникальной нуклеотидной последовательности исследуемого микроорганизма), высокая чувствительность (позволяет диагностировать не только острые, но и латентные варианты инфекции, возможно выявление даже единичных бактерий), возможность определения как вегетативных (спиралевидных), так и кокковых форм H. Pylori, возможность определения отдельных генов микроорганизма для оценки его патогенности, возможность определения микроорганизма в течение 5-6 часов (экспресс-метод).
Что касается прогноза течения гастродуоденальных заболеваний, ассоциированных с хеликобактерной инфекцией, то в этом случае оправдано применение метода Western-blot, позволяющего определить полный серологический профиль, получить информацию о генетических особенностях штаммов Helicobacter Pylori (в частности, об «островке патогенности»), выявить и дифференцировать высокопатогенный и низкопатогенный типы Helicobacter Pylori, а также отличить текущую инфекцию от ранее перенесенной.

С помощью данного метода штаммы H.Pylori подразделяют на 4 серотипа в зависимости от выработки микроорганизмами цитотоксина VacA и цитотоксинассоциированного белка CagA: тип I (CagA+, VacA+), тип Iа (CagA+, VacA-), тип Ib (CagA-, VacA+), тип II (CagA-, VacA-).

Инфицирование CagA+ позитивными (серотип I, Iа) штаммами НР является фактором риска развития выраженного воспалительного ответа.

Обоснованием целесообразности применения метода может служить, во-первых, доказанная на клиническом и экспериментальном материале более выраженная способность штаммов I типа (т. е. штаммов, продуцирующих цитотоксины СagA и VacA) H.Pylori стимулировать апоптоз – запрограммированную гибель клеток в краях язв, тем самым затрудняя их заживление. Во-вторых, достоверные данные о том, что у носителей штаммов I серотипа гораздо чаще развивается атрофический гастрит, возрастает риск развития выраженного воспалительного процесса в слизистой оболочке желудка, значительно увеличивается риск развития язвенной болезни и рака желудка.

Существует ряд специфических антигенов H. Pylori, роль которых как факторов патогенности микроорганизма установлена. Эти антигены острова патогенности H. Pylori также определяют методом Western blot.

Факторы патогенности H.Pylori и их роль в патогенезе хеликобактериоза

Фактор патогенности (белок)	Свойства факторов патогенности
CagA	Цитотоксин, маркер «острова патогенности» H. Pylori, участвует в ремоделировании тканей, ангиогенезе, язвообразовании, развитии атрофии, в процессе деградации и разрушения межклеточного матрикса и базальной мембраны, опухолевой инвазии и метастазировании посредством индукции комплекса uPA (urokinase-type plasminogen activator) и uPAR (urokinase-type plasminogen activator receptor) в раковые клетки в желудке, стимуляции выработки интерлейкина-8, способствует повышению активности антрального гастрита
VacA	Цитотоксин, фактор адгезии, увеличивает проницаемость мембран по отношению к анионам, достоверно уменьшает скорость реэпителизации экспериментальных язв и пролиферацию эпителиоцитов за счет нарушения функции клетки, связанных с целостностью ее цитоскелета, пассивный транспорт мочевины через эпителиальные клетки желудка, влияет на выживание H. Pylori в клетках хозяина, снижает содержание АТФ в эпителиоцитах, стимулирует апоптоз клеток
BabA1, BabA2	Фактор адгезии, рецептор клеток Lewis, предположительно связан с более высокой частотой развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, осложнений инфекции H. Pylori, а также с аденокарциномой желудка (BabA2)
OipA	Поддерживает воспаление СОЖ, связан с секрецией интерлейкина-8 и интерлейкина-6, со степенью обсемененности H. Pylori СОЖ, выраженностью нейтрофильной инфильтрацией, с развитием интерстициальной метаплазии
SabA	Поддерживает воспаление, способствует персистенции инфекции H. Pylori
IceA1, IceA2	Фактор адгезии
FlaA, FlaВ	Обеспечивают подвижность
Уреаза (UreA, UreB, UreC, UreI)	Является собственно маркером инфекции H. Pylori и фактором защиты микроорганизма от действия соляной кислоты, обеспечивает длительное персистирование H. Pylori в желудке человека, усиливает воспалительные реакции посредством активации моноцитов, нейтрофилов, секреции цитокинов, образования свободных радикалов и окиси азота. Считается, что большая субъединица уреазы – UreB – действует как аттрактант для лейкоцитов
HopQ, HopP, HopZ	Является собственно маркером инфекции H. Pylori и фактором защиты микроорганизма от действия соляной кислоты, обеспечивает длительное персистирование H. Pylori в желудке человека, усиливает воспалительные реакции посредством активации моноцитов, нейтрофилов, секреции цитокинов, образования свободных радикалов и окиси азота. Считается, что большая субъединица уреазы – UreB – действует как аттрактант для лейкоцитов
HopQ, HopP, HopZ	Обеспечивает колонизацию и обсемененность слизистой оболочки желудка
HpaA	Фактор адгезии
NapA	Активатор окислительного стресса, способен индуцировать процесс освобождения свободных радикалов в нейтрофилах, что приводит к повреждению СОЖ человека
RdxA, FrxA, FdxB	Ферменты окислительного метаболизма, участвуют в формировании резистентности к метронидазолу

Следует заметить, что по данным, полученным при помощи этого метода можно судить о прогнозе заболеваний, ассоциированных с H.Pylori. Так, например, если у пациента с язвенной болезнью выявляется микроб, содержащий 1-2 гена острова патогенности H. Pylori, то с высокой степенью вероятности, прогноз будет благоприятным, с другой стороны, если у молодого практически здорового человека при профилактическом обследовании  выявляются воспалительно-деструктивные изменения и присутствует H. Pylori, содержащий 5-6 генов острова патогенности, то прогноз неблагоприятен, если своевременно не провести эрадикационную терапию.
Все методы диагностики H. Pylori имеют свои преимущества и недостатки, поэтому, для получения четкого представлены о наличии H. Pylori в организме человека необходимо соблюдать следующие правила диагностики:

• Использование 2-х и более методов диагностики H. Pylori
• Использование сочетания методов из разных групп: инвазивный+неинвазивный, прямой+непрямой для первичной диагностики H. Pylori
• Использование метода ПЦР как наиболее точного для диагностики H. Pylori, а также для определения молекулярно-генетических особенностей микроорганизма для оценки его вирулентности, формирования представления о дальнейшем течении и прогнозе заболевания
• Использование для контроля эрадикации H. Pylori преимущественно неинвазивных методов не ранее, чем через 1,5-2 месяца после окончания терапии.